12月21日，FDA批准丹麦灵北制药的CGRP抗体Eptinezumab，商品名为Vyepti，用于预防偏头痛，是首个全长兔源单抗药物，由Alder公司（现丹麦灵北制药）的ABS技术平台开发而得。

1986年FDA批准首个抗体药物抗CD3单抗OKT3以来，30多个年头批准的绝大部分抗体药物来源于小鼠，其次是噬菌体展示库。2019以来，多个其他物种来源的抗体药物获FDA批准上市。2019年3月首个来源于骆驼的抗体药物Cablivi（首个纳米抗体）获得FDA批准用于治疗aTTP。2019年10月首个兔源单抗药物Beovu（为scFv抗体片段）获 FDA批准治疗湿性AMD。Eptinezumab的获批上市则迎来了首个全长兔单抗药物。

Eptinezumab最初由Alder开发，灵北制药在2019年9月斥资约19.5亿美元收购Alder获得了Eptinezumab全球权益。Alder建立了一套兔单抗发现和筛选的技术平台ABS。通过采用抗原免疫兔、分离出表达抗体的B淋巴细胞，然后进行单个B细胞重链和轻链基因的克隆和体外表达得到功能性全长兔单抗。

▲图1. 兔单抗发现和筛选技术ABS

Alder的ABS技术平台可快速评估宿主中的所有B细胞，并鉴定产生具有治疗作用抗体的关键细胞亚群。利用Alder的专有方法，可以在充分筛选B细胞的同时保持这些B细胞的存活。通过这一过程的反复操作，得到具有治疗作用的理想抗体。 

通过上述ABS技术得到兔单抗后，用人的FR区和CDR区替换兔单抗相应区域并在人FR3之后添加兔CDR3和人FR4氨基酸序列，同时保留对特异性和亲和力至关重要的兔单抗残基，从而对兔抗体进行人源化，使其人源化比例达到95%以上。通过ABS技术得到的兔源抗体具有极高的亲和力，Eptinezumab的亲和力为5pM,远高于一般鼠源抗体的亲和力（1-10nM）。

▲图2. 兔单抗人源化流程

兔与啮齿类动物的免疫系统迥异，相比鼠源单抗具有一定的优势，主要体现在：（1）更高的抗体多样性；（2）小分子等半抗原可产生较强的免疫反应；（3）更高的抗体亲和力；（4）更多数量的B淋巴细胞利于开展研究；（5）抗体基因简单且IgG只有一个亚型，方便进行高通量分子生物学操作；（6）兔单抗的人源化改造更简单，很容易达到95%以上的人源化比例。

▲图3. 序列多样性兔抗体库形成的分子机制

目前在全球范围内开发兔单克隆抗体的公司不多。最初的技术为杂交瘤融合技术， 1995年Katherine Knight教授首先制备了世界上第一株稳定的兔多发性骨髓瘤细胞株240E-1，并与兔B淋巴细胞的同种融合制备能生产兔单抗的兔杂交瘤细胞株，但稳定性仍旧是个大问题。

朱伟民博士随后通过反复亚克隆的方法对其进行改造得到了稳定的细胞株，这些细胞株后来成为其与余国良博士共同创建的Epitomics（杭州宜康生物，2012年被Abcam公司收购）RabMab平台开发兔单克隆抗体的主要工具（美国专利7429487以及5675063）。美国CST也拥有240E-1衍生的兔骨髓瘤细胞株，但由于专利权问题只能利用兔骨髓瘤细胞株自主开发兔单克隆抗体而不能进行CRO服务。

由于专利问题、杂交瘤细胞融合效率和稳定性问题，CST公司在2012年开发了单细胞筛选和克隆技术（NG-XMT），利用NGS技术和蛋白质组技术相结合，在免疫后动物外周血中富集抗体，通过质谱技术获取抗体氨基酸序列信息，再与NGS获得的基因序列信息进行比对获取抗体的轻重链配对信息。此方法存在操作要求高、开发成本高和耗时长等缺点。

为了解决单细胞筛选和克隆技术的上述劣势，优睿生物开发了基于单细胞筛选和克隆的单克隆抗体筛选平台（SMab）。实现了对单个B淋巴细胞的体外培养，培养周期可长达数周，识别抗原的单克隆B细胞阳性率（即分泌抗体IgG的比例）可达60%，且分泌抗体的浓度平均大于1ug/ml。为兔单抗的发现和筛选提供了高效、高通量和高抗体质量的技术平台。

▲图4. 优睿生物兔单克隆抗体筛选平台（SMab）

而在兔源抗体药物开发方面，除了Alder之外，还有瑞士苏黎世的生物技术公司ESBAtech，诺华的Brolucizumab最初为ESBAtech开发（2009年被Alcon以5.9亿美元价格收购）。ESBAtech被收购后，一些核心人员出走创建的Numab也成为兔单抗药物的主要玩家。在国内，余国良和安志强博士创建的泰康生物利用RabMab技术免疫新西南兔开发了VEGF单抗TK001，目前已经启动治疗AMD的临床研究。

2019年是抗体药物来源多样化的突破之年，骆驼和兔子先后登场，打破了小鼠和噬菌体展示的垄断局面。骆驼和兔子来了，人还在路上，羊驼和鲨鱼还会远吗？

1.https://sec.report/Document/0001193125-14-177343/

2.Justus Weber, et al. From rabbitantibody repertoires to rabbit monoclonal antibodies. Experimental& Molecular Medicine 2017 (49)

3.CN101600793B.用于获得抗原特异性B细胞的克隆群体的培养方法

4.CN101868477A.新型兔抗体人源化方法和人源化的兔抗体

5.CST、泰康、Alder、优睿生物等官网